目的 本研究应用钙离子载体ionomycin升高大鼠骨骼肌细胞胞浆钙离子浓度,探讨PKC、AS160、TBC1D1在钙信号调节骨骼肌细胞GLUT4运输机制中的作用。
方法 将稳定过表达GLUT4myc的L6-GLUT4myc大鼠骨骼肌细胞接种于24孔板中,采用siRNA分别下调PKCα和PKCθ蛋白表达,随机分为对照组和ionomycin组,应用ELISA测定细胞表面GLUT4myc水平,Western blot检测PKC底物PKC-S、AS160、TBC1D1的磷酸化。
结果 Ionomycin显著增加L6-GLUT4myc成肌细胞膜上GLUT4myc数量(p<0.001),同时显著升高AS160 Ser341(p<0.05)、Thr642(p<0.01)、TBC1D1 Ser237(p<0.05)、Thr596(p<0.001)以及PKC-S的磷酸化水平。siPKCα和siPKCθ均显著抑制ionomycin升高细胞膜上GLUT4myc的作用(p<0.001),并抑制PKC-S、AS160 Thr642和TBC1D1 Thr596的磷酸化。siPKCα降低ionomycin对GLUT4myc内吞的抑制作用(p<0.001),但不影响ionomycin对 GLUT4myc外排的促进作用。siPKCθ既降低ionomycin对GLUT4myc内吞的抑制作用(p<0.001)又抑制ionomycin 对GLUT4myc外排的促进作用(p<0.001)。
结论 PKCα介导ionomycin抑制GLUT4内吞的作用。PKCθ介导ionomycin促进GLUT4外排及抑制其内吞的作用。钙信号磷酸化AS160和TBC1D1。钙信号可能通过PKCα/PKCθ-TBC1D1/AS160信号通路增加骨骼肌细胞膜上GLUT4数量。