TSH抑制脂肪细胞IRS-1酪氨酸磷酸化机制的研究
作者：张雅静|刘佳|张琳|张宏 来源：天津医科大学代谢病医院 内分泌研究所 浏览次数：0次
目的 大量的研究表明，促甲状腺激素（TSH）与脂肪细胞胰岛素抵抗相关，但其机制尚不明确。前期研究表明，TSH与脂肪细胞表面促甲状腺激素受体（TSHR）结合后，能够促进脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）。本研究拟探讨TSH是否会通过促进脂肪细胞TNF-α的分泌，进而影响胰岛素受体底物1（IRS-1）蛋白表达及其酪氨酸磷酸化，参与脂肪组织胰岛素抵抗的发生及其可能的信号转导通路。
方法 小鼠3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞，予以不同浓度牛TSH刺激（0.01, 0.1, and 1.0 mIU/ml）后，以酶联免疫法检测培基内TNF-α浓度，电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-кB活性、western blotting方法检测IRS-1蛋白表达的变化、免疫沉淀法检测IRS-1酪氨酸磷酸化水平。
结果 随着TSH刺激浓度的增加，培养基中TNF-α水平呈上升趋势（P＜0.05）。而蛋白激酶A抑制剂（H89）和NF-кB核转位抑制剂（BAY 11-7082）均可抑制TSH对TNF-α分泌的促进作用。电泳迁移率变动分析结果显示，TSH激活NF-кB，在凝胶电泳图上可看到随着TSH刺激浓度的增加，NF-кB/DNA探针结合条带逐渐增强，当加入H89后，条带明显减弱，提示TSH使NF-кB活性增强是通过蛋白激酶A通路实现的。IRS-1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化水平随TSH刺激浓度增加均呈下降趋势（P＜0.05），H89、BAY11-7082可抑制这一效应，予以TNF-α拮抗剂（WP9QY）干预可以逆转TSH对IRS-1的抑制作用。
结论 TSH与3T3-L1脂肪细胞表面TSHR结合后，通过激活cAMP-PKA通路，活化NF-кB，促进脂肪细胞TNF-α的分泌，影响脂肪细胞IRS-1蛋白表达，并干扰IRS-1正常的酪氨酸磷酸化，进而参与胰岛素抵抗的发生。
