目的 研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)结合血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)诱导的大鼠肝窦内皮细胞(mHSECs)舒张功能障碍的机制。
方法 原代分离培养mHSECs。实验分四组:正常对照组、ox-LDL组、PCA组(PCA ,LOX-1抑制剂)和P5499组(P5499,AMPK抑制剂);首先用250 ug/ml PCA和 50μM P5499分别处理mHSECs,然后加入100mg/L的ox-LDL,培养48 h,采用实时RT-PCR和Western-blot检测各组细胞内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS) 、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及AMPK的mRNA和蛋白表达水平。采用SPSS17.0软件进行统计学分析。
结果 ox-LDL组ET-1 和iNOS的mRNA和蛋白表达均高于对照组,eNOS mRNA和蛋白表达低于对照组;LOX-1抑制剂组ET-1和AMPK的蛋白表达明显减少,eNOS的蛋白表达显著升高,与ox-LDL组比较,ET-1、iNOS和AMPK的蛋白表达分别降低了22.64%、16.35%和18.15%,而eNOS的蛋白增加了32.36%;P5499组ET-1和iNOS的蛋白表达明显减少,eNOS的蛋白表达显著升高,与ox-LDL组比较,ET-1和iNOS的蛋白表达分别降低了21.27%和16.88%,而eNOS的蛋白增加了17.02%,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论ox-LDL可上调ET-1和iNOS、下调eNOS表达,诱导肝窦内皮细胞舒张功能平衡失调,AMPK途径参与了ox-LDL/LOX-1诱导的肝窦内皮细胞功能障碍;抑制LOX-1和AMPK可降低ox-LDL诱导的肝窦内皮细胞ET-1和和iNOS的表达,上调eNOS 的表达,由此说明LOX-1/AMPK参与了ox-LDL诱导的肝窦内皮细胞舒张功能障碍。