目的 探讨LOX-1对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)培养条件下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)合成和分泌血管活性物质的影响。
方法 从新鲜脐带中分离培养且鉴定HUVECs,实验随机分为对照组、10ug/ml ox-LDL组、40ug/ml ox-LDL组、80ug/ml ox-LDL组、250ug/ml多聚肌苷酸+80 ug/ml ox-LDL组,分别培养到6、24、48小时。MTT检测细胞存活率;硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测ET-1的表达;分光光度法检测一氧化氮合酶(NOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性;实时荧光定量RT-PCR检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、ET-1及JNK mRNA的表达;免疫荧光法检测磷酸化氨基末端蛋白激酶(pJNK)的表达。
结果 与正常对照组比较,ox-LDL状态下细胞存活率降低;NO的分泌在6h、24h升高而在48h降低,与NOS、iNOS活性的变化一致;而ET-1的表达在24h和48h都是升高的,且与mRNA ET-1的变化相同;JNK信号通路被激活,其在核内表达的荧光值增高。与ox-LDL组比较,250ug/ml多聚肌苷酸干预后细胞的存活率升高;改变NO的分泌和NOS、iNOS的活性,上调mRNA eNOS的表达;明显的下调ET-1和mRNA ET-1的表达,使ET-1/NO比例下降;使p-JNK核内表达的荧光值降低。
结论 ox-LDL所致人脐静脉内皮细胞功能有损伤作用,并呈时间依赖性和浓度依赖性,且此作用可能与ox-LDL条件下LOX-1所介导的JNK细胞传导通路有关。