目的 探讨1例永久性新生儿糖尿病患者的致病基因及其致病机制。
方法 分析1例永久性新生儿糖尿病患者的临床特点，抽提家系成员的基因组DNA，PCR扩增后进行GCK基因直接测序。构建野生型和突变型质粒，体外表达并纯化葡萄糖激酶重组蛋白，进行酶动力学和热稳定性分析。
结果 在该新生儿糖尿病患者发现GCK基因c.571 C>T（R191W）和c.1136 C>A（A379E）复合杂和突变。功能学分析显示，与野生型相比，R191W和A379E突变导致蛋白产量明显下降[分别为（85.8±8.7）mg/L比（47.7±8.1）mg/L，P<0.01；（85.8±8.7）mg/L比（54.5±5.3）mg/L，P<0.01]；S_0.5显著升高[分别为（7.63±0.21）mmoL／L比（35.27±2.20）mmol／L，P<0.001；（7.63±0.21）mmoL／L比（13.30±0.44）mmol／L，P<0.001]；ATP-K_m显著升高[分别为（0.30±0.01）mmol／L比（0.42±0.01）mmol／L，P<0.001；（0.30±0.01）mmol／L比（0.54±0.04）mmol／L，P<0.001]；突变型蛋白对葡萄糖的催化常数显著下降[分别为（20.9±2.1）/s比（6.5±1.0）/s，P<0.001；（20.9±2.1）/s比（10.5±1.1）/s，P<0.01]。突变型蛋白的热稳定性下降，表现为同一孵育温度下或同一温度更短时间内酶活性的快速丧失。
结论 GCK基因R191W和A379E复合杂和突变是该新生儿糖尿病的致病原因。突变导致的蛋白表达下降、酶对葡萄糖和对ATP的亲和力下降以及热稳定性的下降可能是其致病机制。