目的 分析高浓度的葡萄糖刺激下Ins-1细胞的凋亡状况及加入没食子酸作用后高糖状态下INS-1细胞凋亡的情况;探讨酚酸类化合物在治疗2型糖尿病的应用价值。
方法 (1)没食子酸、Ins-1细胞、葡萄糖、;RPMI 1640培养基、Annexin Ⅴ-FITC\PI细胞凋亡检测试剂盒、gibco澳洲胎牛血清、蛋白裂解液、TXNIP抗体、BCA蛋白定量试剂盒、胰蛋白酶等。
(2)方法:RPMI-1640培养基常规培养细胞,选取对数生长期细胞种于六孔板中,将细胞分为四组,即正常组、高糖组、
正常给药组、高糖给药组,作用 24小时后,用流式细胞术分别检测细胞凋亡状况,用Western法检测细胞中TXNIP的表达情况。
结果 高糖刺激 下Ins-1细胞的生长受到了抑制,作用24h,葡萄糖浓度为25mmol\L时,抑制率达到22.17%;而糖浓度为50mmol\L时,抑制率高达34.08%;没食子酸作用后,Ins-1细胞的抑制率下降,葡萄糖浓度为25mmol\L,抑制率由原先不加药时的22%下降至10%左右;高糖状态下,TXNIP的表达升高,没食子酸作用后TXNIP的表达明显降低。
结论 没食子酸(gallic acid,GA)又名五倍子酸,化学名为3,4,5-三羟基苯甲酸,具有抗肿瘤、抗炎、抗突变、杀锥虫、清除自由基等生物学效应。本实验显示高糖刺激会造成Ins-1细胞凋亡,加入没食子酸后,凋亡率降低,可明显抑制TXNIP(硫氧还蛋白相互作用蛋白)的表达,提示没食子酸除具有抗炎、抗突变、抗肿瘤等作用外,尚具有保护Ins-1细胞作用,
本实验提示没食子酸具有一定的抑制Ins-1细胞的作用,可为将来用于治疗2型糖尿病保护胰岛细胞具有价值及意义。