目的 明确3T3-L1成熟脂肪细胞特异性核酸适体Adipo8是否可被该靶细胞特异性内吞。并构建Adipo8金纳米粒子载药复合物,验证该复合物可特异性与3T3-L1成熟脂肪细胞结合并进入靶细胞内。
方法 选择分化第8天的3T3-L1成熟脂肪细胞,带cy3荧光信号的Adipo8分别在4°C及37°C下孵育2h,洗涤后在37°C与胰酶孵育30min,检测荧光强度,检测Adipo8是否内吞入胞内;化学合成直径为13nm的金纳米粒子,用Adipo8与富含GC碱基的DNA载药序列修饰金纳米粒子,检测该复合物与诱导分化3T3-L1细胞的结合是否仍存在特异性,流式细胞仪检测Adipo8/金纳米粒子载药复合物是否入胞内;将阿霉素修饰到载药复合物,并用MTT实验检测该载药复合物干预后细胞活性,评估其对靶细胞的杀伤作用是否存在特异性。
结果 流式荧光分析提示核酸适体Adipo8不能被内吞入成熟脂肪细胞。成功合成了直径为13nm的金纳米粒子,并在其上修饰Adipo8和载药GC序列。检测结果发现该载药复合物仍可特异性结合3T3-L1成熟脂肪细胞,该复合物通过内吞进入胞内。MTT实验评估细胞活力,修饰Adipo8的金纳米粒子载药复合物对成熟脂肪细胞杀伤作用高于3T3-L1前脂肪细胞(P<0.05);而随机序列的金纳米载阿霉素组对3T3-L1成熟靶细胞和3T3-L1前脂肪细胞均有杀伤作用,但他们之间差别无统计学差异(P>0.05);载药两组间对3T3-L1前脂肪细胞杀伤程度无统计差异(P>0.05);修饰Adipo8组对成熟脂肪细胞杀伤作用高于修饰随机序列组,两组之间存在统计学差异(P<0.05)。
结论 1. 3T3-L1成熟脂肪细胞对Adipo8无内吞作用,Adipo8不能直接进入3T3-L1成熟脂肪细胞内。
2. 基于Adipo8构建的金纳米粒子载药复合物能特异性识别靶细胞并被靶细胞内吞入细胞内发挥作用。