目的 糖尿病肾病是糖尿病最严重的慢性并发症之一,国内多项临床研究均有报道,以银杏叶联合西医疗法治疗早期糖尿病肾病疗效显著,但其作用机制尚不明确。因此,本课题拟运用细胞实验,阐明银杏叶治疗早期糖尿病肾病的可能药理机制。
方法 通过趋化实验、粘附实验检测 HRMC 对单核细胞 U937 的趋化、粘附功能。提取 HRMC 总 RNA,应用实时定量 RT-PCR 技术检测其 Fractalkine mRNA 的表达。用 Western blotting 检测 Fractalkine、ERK1/2、JNK、p38MAPK、IκBa、NIK 和 NF-κB p65 蛋白表达水平。用 ELISA 法检测细胞上清中 Fractalkine 的含量。
结果 ① AGEs 组HRMC 对单核细胞 U937 的趋化与粘附功能显著高于对照组 ;AG组、EGB761组显著低于 AGEs 组 (p < 0.05)。②AGEs组Fractalkine mRNA 与蛋白表达、细胞上清中 Fractalkine 含量显著高于对照组;EGB761 组显著低于 AGEs 组 (p < 0.05)。③ AGEs组p-ERK1/2、p-p38MAPK、 p-JNK 蛋白表达显著高于对照组,NIK 蛋白表达增加、IκBa 蛋白表达的下降、以及胞核内 NF-κB p65 增加,且 Fractalkine 蛋白表达增加;EGB761组可逆转上述改变,且 Fractalkine 蛋白表达显著低于 AGEs 组 (p < 0.05)。
结论 EGB761 可以通过抑制活化的 MAPKs – NF-KB 炎症信号通路,减少下游趋化因子 Fractalkine 的表达,从而减少炎症细胞的趋化与粘附,减轻肾脏细胞炎症、延缓糖尿病肾病的进展。