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人胰岛星状细胞对胰岛β细胞功能的影响
作者:查敏|李伟|孙子林 来源:东南大学附属中大医院 浏览次数:0次

目的 我们前期从大鼠胰岛中成功分离胰岛星状细胞(ISC),并发现其参与2型糖尿病胰岛纤维化的发生。本研究尝试从人胰岛中分离星状细胞,并观察人ISC对胰岛细胞的影响。

方法 通过胶原酶消化法,从人胰岛中分离ISC,并以人胰腺星状细胞(PSC)作为对照。平滑肌激动蛋白-a(a-SMA)、结蛋白(desmin)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、波形蛋白 (vimentin) 免疫荧光鉴定人ISC,CCK-8试验比较人ISC和PSC增殖能力,划痕及transwell试验比较ISC和PSC的迁移能力,Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白(Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN)免疫荧光观察ISC分泌细胞外基质(ECM)的能力。并将人胰岛与活化后的ISC接触式共培养,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛素释放功能,caspase-3活性检测胰岛细胞凋亡。进一步脱细胞技术分离人ISC-ECM干预人胰岛,FDA/PI双染观察胰岛细胞活力。

结果 贴壁培养的人胰岛外生众多星状细胞,活化的人ISC免疫荧光可见a-SMAdesminvimentinGFAP染色,表达col-col-FN。与PSC相比,人ISC增殖显著降低。划痕与Transwell实验示ISC的迁移能力显著低于PSC。人ISC与胰岛接触式共培养后,葡萄糖刺激下胰岛素释放水平增强,而各组胞内胰岛素含量无统计学差异。Caspase-3活性检测提示两组凋亡无统计学差异。ISC-ECM与胰岛共培养后,明显引起胰岛形态破坏,FDA染色可见少量细胞阳性,几乎100%细胞呈现PI阳性。

结论 本实验成功提取出ISC,活化的ISC可表达a-SMA、desmin、vimentin及GFAP,合成ECM,具有PSC的基本特性。但是其增殖和迁移能力明显弱于PSC。人ISC与胰岛接触式共培养后胰岛功能得到部分改善,但进一步分离的ISC-ECM可显著导致胰岛细胞死亡。
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