目的 过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPAR-γ)在调节能量平衡、糖脂代谢、炎症等方面发挥重要作用。研究显示,PPAR-γ激动剂罗格列酮可发挥多种抗癌效应,但其对T细胞性白血病的影响尚未见报道。本研究拟在T细胞性白血病细胞系Jurkat中观察罗格列酮对细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨可能的作用机制。
方法 (1)利用RT-PCR技术检测Jurkat细胞中PPAR-γ的表达。(2)采用不同浓度罗格列酮(0,1,2,5,10,20 μmol/L)干预Jurkat细胞24-96 h,并用二甲双胍作为阳性对照(1,10 mmol/L),分析罗格列酮对细胞增殖和凋亡的影响。(3)应用流式细胞术检测细胞周期,CCK8方法检测细胞增殖情况,WB技术检测增殖标志物的表达。(4)应用流式细胞术Annexin V-PI方法检测细胞凋亡,Western blot技术检测凋亡相关蛋白的表达情况。(5)应用PCR技术检测PPAR-γ、胰岛素受体(INSR)及胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)表达的变化。
结果 (1)Jurkat细胞可表达PPAR-γ。(2)两种浓度二甲双胍可增加S期细胞数,高浓度二甲双胍效果更明显;罗格列酮则呈剂量依赖性增加G0/G1期细胞数。罗格列酮和二甲双胍均可剂量依赖性抑制细胞增殖,降低增殖标志物PCNA的表达。(3)两种浓度二甲双胍可增加凋亡细胞的比例,上调促凋亡蛋白Bax和活性Caspase3的表达,高浓度二甲双胍效果更明显;不同浓度罗格列酮虽有增加凋亡细胞比例、上调Bax和活性Caspase3表达的趋势,但均无统计学差异。(4)罗格列酮可剂量依赖性上调PPAR-γ的表达,下调INSR和IGF-1R的表达。
结论 罗格列酮可抑制T细胞性白血病细胞增殖,使细胞阻滞于G0/G1期,上述效应可能是通过上调PPAR-γ、抑制INSR和IGF-1R表达而实现的。