目的 探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)对高糖诱导的足细胞凋亡的影响及机制。
方法 采用贴壁法制备人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)。足细胞分组:(1)正常糖组(NG);(2)高糖组(HG);(3)甘露醇渗透压对照组组(NG+MA);(4)HUC-MSCs和足细胞transwell共培养组(HUC-MSCs)。刺激72h后,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白PARP、Bcl-2的表达,流式细胞术检测足细胞凋亡率,Hoechst染色检测足细胞凋亡水平。ELISA检测HUC-MSCs分泌HGF水平。同时,采用HGF抗体,或rhHGF,探讨HGF在HUC-MSCs抗凋亡机制中的作用。
结果
1. 处理72h后,免疫印迹法显示:与NG组比较,HG组凋亡标志蛋白PARP的表达增多、Bcl-2表达减少(P<0.05),与HG组比较,HUC-MSCs共培养组PARP的表达减少、Bcl-2表达增加(P<0.05)。流式细胞术显示:与NG组比较,HG组足细胞凋亡率增多(P<0.05);与HG组比较,HUC-MSCs共培养组足细胞凋亡率减少(P<0.05)。Hoechst染色显示:HG组足细胞呈现典型凋亡形态; HUC-MSCs共培养组细胞核形态正常。NG+Ma组无凋亡指标改变。
3. ELISA检测HUC-MSCs分泌大量HGF。与高糖组比较,rhHGF组PARP的表达减少、Bcl-2表达增加(P<0.05),足细胞凋亡率减少(P<0.05)。与HUC-MSCs组比较,加入HGF中和抗体后PARP的表达增多,Bcl-2表达减少(P<0.05)足细胞凋亡率增多(P<0.05)。
结论
1. HUC-MSCs可以减轻高糖诱导的足细胞凋亡。
2. HUC-MSCs对高糖诱导足细胞凋亡的保护作用与分泌HGF有关。