目的 体外研究利拉鲁肽对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)增殖、凋亡的作用,比较其与胰升糖素样肽-1(GLP-1)作用效果的差异,初步探讨其与PI3K/Akt通路之间的关系,并进一步采用高糖、尼克酰胺、利拉鲁肽三步法诱导hUC-MSCs分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),观察利拉鲁肽在其中的作用。
方法 (1)用10-9、10-8、10-7mol/L三种浓度利拉鲁肽和GLP-1分别处理细胞24h、48h后,用CCK-8法和流式细胞术测其增殖能力和凋亡率;(2)采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测细胞内第二信使环磷酸腺苷(cAMP)的浓度,Western Blot检测P-Akt、T-Akt蛋白的表达,并进一步分为正常细胞对照组、利拉鲁肽组(Lira组),LY294002组(LY组)和Lira+LY组;(3)倒置显微镜下观察各组细胞诱导前后形态学变化,双硫腙染色鉴定诱导后细胞,ELISA法测细胞上清液中胰岛素浓度及细胞对高糖刺激的反应,Western Blot检测各诱导阶段胰十二指肠同源盒1(PDX-1)、胰岛素蛋白的表达。
结果 (1)培养细胞24h,与各自的对照组比较,Lira 10-9mol/L增殖力无显著性差异(P>0.05),GLP-1与利拉鲁肽其余各浓度组的增殖力均增高(t=3.152、5.05、6.521、7.335、12.1,均P<0.05)。与各自的对照组比较,GLP-1与利拉鲁肽各浓度组凋亡率均降低(P<0.05)。培养细胞48h, 与各自的对照组比较,GLP-110-9mol/L、Lira 10-9mol/L和GLP-1 10-8mol/L浓度组增殖力无显著性差异(P>0.05),