目的 研究SIRT4抗足细胞凋亡作用及其机制的探讨。
方法 高糖培养足细胞,CCK8检测高糖对足细胞增殖的影响;Q-PCR和Western blot方法检测SIRT4的表达。构建SIRT4基因过表达载体,实验设空载体组、模型组、模型+SIRT4过表达组,FCM检测各组高糖诱导的足细胞周期和凋亡的影响;FCM检测各组对足细胞ROS(DCFA-DA)和MMP(JC-1探针)的影响;ELISA检测各组高糖刺激足细胞模型组TNF-a、IL-1β、IL-6等指标的改变;Western blot方法检测各组SIRT4、NOX1、Bcl-2、Bax、P38、P-P38的表达。
结果 随着糖的浓度增高及培养时间延长,足细胞增殖活性明显下降。高糖组足细胞SIRT4较对照组水平下降(P < 0.01)。模型+SIRT4过表达组较对照组足细胞凋亡下降(P < 0.01),模型+SIRT4过表达组较对照组足细胞MMP水平上升(P < 0.01),而ROS水平下降(P < 0.01);模型+SIRT4过表达组较对照组足细胞NOX1、Bax、P38、P-P38水平下降(P < 0.01),而Bcl-2水平升高(P < 0.01);模型+SIRT4过表达组较对照组足细胞TNF-a、IL-1β、IL-6水平下降(P < 0.01)。
结论 SIRT4过表达能减少足细胞的凋亡,其机制与抗线粒体氧化应激及减少炎症因子的产生有关。