目的 探讨胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为胰岛样细胞(IPCs)的机制。
方法 通过贴壁培养法纯化BMSCs,分为4组,A:未感染组,B:MafA感染组,C:Pdx-1-Ngn3感染组,D:联合感染组,高糖条件下培养7天, 荧光显微镜观察其感染效率。Western blot检测各组细胞Pdx-1、Ngn3和MafA表达情况,RT- PCR检测各组胰岛素2(Insulin2)、葡萄糖激酶(GK)、巢蛋白(Nestin)、胰高血糖素(Glucagon)及Pdx-1表达水平,ELISA法检测各组胰岛素分泌情况。
结果 分离的细胞表面高表达CD44、CD105,而低表达CD34。诱导过程中各感染组BMSCs逐渐聚集并形成细胞团块,双硫棕染色呈红棕色;各组在感染第0、3、5、7、9天胰岛素分泌水平逐渐提高,且联合感染组升高最为明显(P<0.05);与A组相比,B、C和D组Pdx-1、Insulin2、Glucagon及GK基因表达明显上调(P<0.05);与B组相比,C组Pdx-1表达上调,D组Pdx-1和Insulin2表达上调, Glucagon表达下调(P<0.05);与C组相比,D组Glucagon表达上调(P<0.05)。
结论 Pdx-1、Ngn3联合MafA共同感染BMSCs可分化为IPCs。